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幼蟲(chóng)芽孢桿菌PCR檢測(cè)試劑盒規(guī)格

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更新時(shí)間:2021-03-13
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注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

 產(chǎn)品名稱(chēng)

 幼蟲(chóng)芽孢桿菌PCR檢測(cè)試劑盒規(guī)格

 英文名稱(chēng)

 Paenibacillus larvaePCR

 貨號(hào)

 LZP7104

組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)謩e配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B:1×10ml。
?
實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
ddH2O至               50 μl
PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿(mǎn)意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi),并且要充分混勻。
2,2′-O-Cyclouridine叔丁基亞磺酰氯 97%順-6-壬烯  95%

2′-BrdU二甲基烯酸四乙二酯 包含~0.006% 對(duì)苯二酚 穩(wěn)定劑, 90%順-6-壬烯  95%,FG

2′-O-Methyl-Uridine硫鏈絲菌肽 90%丁位壬內(nèi)酯  98%

2′-Azido-2′-deoxyuridine三苯基硅乙炔 98%乙酸橙花酯  95%

2-FDU四(THF) 無(wú)級(jí),≥99.9%, 無(wú)穩(wěn)定劑正辛 AR,99.0%

2-FDC三乙烯四胺 Standard for GC1-辛 99%

Ara-A原甲酸*酯 99.8%,無(wú)級(jí)1-辛 97%

Ara-C鹽酸硫胺 分析標(biāo)準(zhǔn)品羅勒烯  90%

Uracil 1-β-D-arabifuraside2,3,5-三酚 分析標(biāo)準(zhǔn)品桂酸苯乙酯 96%

1-β-D-Arabifurasylthymine1,1,1-三(羥甲基)乙烷 97%3-苯 99%

Trifluorothymidine三氟磺酰氯 99%3-苯 ≥98%, FCC

Cyclo-C十三 97%3-苯酸 GR,99%

RNA四丁基氫氧化銨 ~40% 溶液,離子色譜級(jí)3-苯 95%

t-RNA2,4,5-三氯苯酚 分析標(biāo)準(zhǔn)品3-苯 ≥95%,  FCC

RNA-Na甲基叔戊基 97%異丁酸苯氧基乙酯 98%

DNADL-α-酚琥珀酸酯 分析標(biāo)準(zhǔn)品異丁酸苯氧基乙酯 ≥98%, FCC

子囊霉素Tri-Methyl-Histone H3 (Lys4) (C42D8) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate)S100A6  S100鈣結(jié)合蛋白A6抗體

子囊霉素(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb (APC Conjugate)S100A4  S100A4抗體

阿扎那韋XPD (D3Z6I) Rabbit mAbS100A14  S100A14/15抗體

阿扎那韋(標(biāo)準(zhǔn)品)Human IL-4 Neutralizing (D20H1) Rabbit mAbS100A13  S100A13抗體

鹽酸托莫西汀LIN28B (D4H1) Rabbit mAbS100A11  S100鈣結(jié)合蛋白A11抗體

鹽酸托莫西汀(標(biāo)準(zhǔn)品)BRM (D9E8B) XP® Rabbit mAbS100A10  S100鈣結(jié)合蛋白A10抗體

阿托伐醌,阿托喹酮BRM (D9E8B) XP® Rabbit mAbS-100/S100A1  S100A1抗體

阿托伐醌,阿托喹酮(標(biāo)準(zhǔn)品)COX IV (4D11-B3-E8) Mouse mAbS100 alpha 2  S100A2抗體

阿西替尼SignalSilence® ADAM9 siRNA IRYBP/APAP1/CD337  凋亡相關(guān)蛋白1抗體

阿扎哌隆Mouse TNF-α Neutralizing (D2H4) Rabbit mAbRyadine Receptor  心肌蘭尼堿受體抗體(腦肌蘭尼堿受體)
幼蟲(chóng)芽孢桿菌PCR檢測(cè)試劑盒規(guī)格人抗多發(fā)性肌炎硬皮病抗體(PM-Scl/PM-1)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:25毫升

人抗紡錘體抗體(MSA)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:25克

人抗肺泡基底膜抗體(ABM-Ab)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:100克

人抗風(fēng)疹病毒IgG抗體(anti-RVIgG)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:100克

人抗風(fēng)疹病毒IgM抗體(anti-RVIgM)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:保存:-20℃10毫克

人抗副流感病毒IgG抗體(anti-PIVIgG)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:2~8℃5片

人抗副流感病毒IgM抗體(anti-PIVIgM)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:10個(gè)

人抗鈣蛋白酶抑素抗體(ACAST-DⅣ)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:5000u
檢測(cè)步驟:
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照),每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
1) 計(jì)算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。

 

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