組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)謩e配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

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實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。檢測(cè)步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。
正(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-4E-BP1 (Thr37/46) (236B4) Rabbit mAb丁香

滅菌唑(分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.2%)Phospho-4E-BP1 (Thr37/46) (236B4) Rabbit mAb四三氧化二

殺蟲(chóng)環(huán)標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=5%,基體：甲)Phospho-4E-BP1 (Thr37/46) (236B4) Rabbit mAb3,5-二氟肼鹽酸鹽

標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=6%)Phospho-DUSP1/MKP1 (Ser359) (125E2) Rabbit mAb2-甲基-6-甲酸

氨靈(標(biāo)準(zhǔn)品)eIF4GI Antibody2-甲基-硝基吡啶

1,2,4,5-四標(biāo)準(zhǔn)溶液(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-IκBα (Ser32) (14D4) Rabbit mAb2,5-二酸

1,2,3,5-四(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-IκBα (Ser32) (14D4) Rabbit mAb氟間二

氟脲(分析標(biāo)準(zhǔn)品,98%(HPLC))Phospho-IκBα (Ser32) (14D4) Rabbit mAb銅鐵試劑

氟脲(分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%(HPLC))p190-A RhoGAP (C59F7) Rabbit mAb2-氨基-溴吡啶

1,2,三(分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99.8%（GC))Phospho-c-Abl (Tyr245) Antibody氟-甲

1,2,4,5-四標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.104mg/ml,基體:異辛烷)c-Abl Antibody2,二-5-嘧啶

標(biāo)準(zhǔn)溶液(202mg/L,基體:甲)c-Abl Antibody2-氨基-溴甲酸甲酯

標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=4%)Plectin-1 Antibody環(huán)氧柏木烷

標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=7%)Phospho-c-Abl (Thr735) Antibody1-Boc-吡咯-2-酸

三唑(分析標(biāo)準(zhǔn)品,>97%(HPLC))Phospho-c-Abl (Tyr412) (247C7) Rabbit mAbbeta-托品

蟲(chóng)酰肼(分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%)Survivin (71G4B7) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)基-2,6-二-(三氟甲基)吡啶

甲基立枯(分析標(biāo)準(zhǔn)品,98%)Hexokinase II (C64G5) Rabbit mAb基-三氟甲基吡啶

殺蟲(chóng)單(標(biāo)準(zhǔn)品)Hexokinase II (C64G5) Rabbit mAb1,1-雙(甲硫基)-2-亞硝基

牛血栓素B2(TXB2)ELISA試劑盒RANK  核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB受體100 ul

牛血清淀粉樣蛋白A(SAA)ELISA試劑盒OPGL/ODF  骨保護(hù)蛋白配體(破骨細(xì)胞分化因子)100 ul

牛血清白蛋白(BSA)(IgG)ELISA試劑盒OPN  骨橋蛋白(分泌型蛋白1)100 ul

牛血清白蛋白(BSA)(IgA)ELISA試劑盒OPN  骨橋蛋白(分泌型蛋白1)300 ul

牛血清白蛋白(BSA)ELISA試劑盒Orexin-A  增食欲素-A/欲激素A100 ul

牛血清白蛋白(ALB)ELISA試劑盒Osrix  成骨相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子100 ul

牛血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體3(VEGFR-3)ELISA試劑盒Os05g0477200 proin  水稻白葉枯病菌Os05g0477200蛋白100 ul

牛血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子C(VEGFC)ELISA試劑盒oxytocin receptor  催產(chǎn)素受體(縮宮素受體)20 ul

牛雄二酮(ASD)ELISA試劑盒OVA  雞卵白蛋白/卵清蛋白100 ul
羊偽結(jié)核棒狀桿菌PCR檢測(cè)試劑盒廠家細(xì)胞周期素依賴(lài)激酶2相關(guān)蛋白2抗體Petiolin F中文名：別名：分子式：C19H20O10

1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框201抗體Garcimultiflorone J中文名：別名：分子式：C38H48O6

卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白7抗體Isorhapontin中文名：別名：分子式：C21H24O9

卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白80抗體Shegansu B中文名：射干素B別名：Parvifolol D; 射干乙素分子式：C30H26O8

CD163蛋白樣1抗體2-(2,4-Dihydroxybenzoyl)benzoic acid中文名：別名：分子式：C14H10O5