產品名稱：正常結腸成纖維細胞
英文簡稱：CCD-18Co 細胞

貨號：LZ-X969697
規格：T25
生長特性：貼壁

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凍存培養基：
凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養基。凍存培養基中應含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的*凍存培養基。
1）細胞凍存培養基是一種用于哺乳動物細胞的即用型*凍存培養基，其所含胎牛血清和牛血清比例經過優化，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果。 
2）凍存培養基是一種化學成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養基，含10% DMSO，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
培養細胞凍存方案：
以下實驗方案介紹了培養細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案，必須參閱針對具體細胞的產品說明書。 
1.配制凍存培養基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養容器上脫離下來。用該細胞所需*培養基重新懸浮細胞。
3.采用、細胞計數儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數儀測定總細胞數和活細胞百分比。根據所需活細胞密度，計算凍存培養基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細胞沉淀。
注：離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預冷的凍存培養基重新懸浮細胞沉淀，將其調整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應不時輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C。或者，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。

實驗材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個；
3、50ml離心筒2個 
4、滅菌培養皿1個，細胞培養瓶1個 
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 
6、細胞計數板1塊； 
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 
8、酒精燈1臺；

實驗報告：
一、分離與培養：
   1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
   3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
   4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
   5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
   2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
   4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
   5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
   6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項：
     盡管經測試Annexin V-FITC反復凍融5次對于其檢測效果無顯著影響，但為取得良好的使用效果，3-6個月內推薦4℃保存，并適當注意避免反復凍融。
     如果有細菌或真菌污染，會嚴重影響檢測效果。
     染色后宜盡快檢測，時間過長可能會導致凋亡或壞死細胞的數量增加。
     如果細胞收集過程中使用了胰酶，需注意設法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC，導致染色失敗。
     熒光物質均易發生淬滅，在進行熒光觀察時，盡量縮短觀察時間，同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
     用于流式細胞儀檢測時，如果發現Annexin V-FITC單獨染色時出現了過多的PI假陽性細胞，并且通過調整相關設置和參數也無法改善，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進行檢測，這樣通常可以有效減少假陽性的壞死細胞。
     需自備PBS。
     本產品于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。
     為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
麥冬皂苷APulchinenoside A；白頭翁皂苷A/白頭翁皂苷A320 倍 SSPE分子生物級濃縮緩沖溶液

麥冬皂苷BTopotecan；拓撲替康20％Formalin固著液

麥冬皂苷CDL-Isoborneol；異龍腦 20％中性Formalin固著液

麥冬皂苷DDL-Isoborneol；異龍腦 200微升1厘米光徑玻璃比色皿

麥冬皂苷D'Butylated hydroxytoluene；2,6-二叔丁基對甲酚200微升1厘米光徑石英比色皿

麥角甾6-O-Nicotinoylscutebarbatine G；6-O-煙酰半枝蓮堿G200微升1厘米光徑塑料比色皿

麥芽糖Nitidine chloride；氯化兩面針堿20毫升玻璃勻漿器

蔓荊子黃素(R)-(+)-Corypalmine；D-四氫藥根堿3%蛋白電泳聚集預制膠溶液

芒柄花黃素Protopine；原阿片堿3,4-二氫嘧啶酮衍生物Monastrol（K-ATPase 抑制劑）

芒果苷Quinine；奎寧3’端銜接體（LINKER）連接試劑盒

莽草酸Dimethyl phthalate；鄰苯二甲酸二甲酯3’末端DNA探針同位素（[α32P]dATP）聚合酶標記試劑盒

貓眼草黃素Zeatin；玉米素3’末端DNA探針同位素（[α32P]dATP）轉移酶標記試劑盒

毛地黃素Sodium DeMethylcantharidate；去甲斑蝥酸鈉3’末端DNA探針同位素（[α32P]dCTP）聚合酶標記試劑盒

毛萼結甲Nystose；蔗果四糖/耐斯糖3’末端RNA探針同位素（[32P]pCp）連接酶標記試劑盒

毛鉤藤堿Periplocin；杠柳苷3’末端RNA探針同位素（[α32P]dATP）聚合酶標記試劑盒
CCD-18Co 細胞抑癌蛋白DKK1抗體三叔丁（標準品） Oil red O/Solvent Red 27

膜轉運蛋白DISPA抗體三蔗糖（標準品） Sudan red G/Solvent Red 1

DIRAS2蛋白抗體三葉豆紫檀苷(標準品) Sudan Black B /Solvent Black 3

DDX58抗體桑皮苷A（標準品） Sudan Red B/Solvent Red 25

DDX4抗體色甘鈉（標準品） Sudan Red 7B/Solvent Red 19

鴨瘟病DPV抗體沙蟾精(標準品) Sudan Blue II/Solvent Blue 35

交聯纖維蛋白二聚體抗體沙丁（標準品） Methyl red

腦發育調節蛋白抗體沙利度(標準品) m-Methyl red

DNA斷裂因子抗體（蛋白酶激活脫氧核糖核酶）山梨（標準品） Methyl Red sodium salt