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產品名稱：永生化角質形成細胞
英文簡稱：Hacat 細胞

貨號：LZ-X969737
規(guī)格：T25
生長特性：貼壁

凍存培養(yǎng)基：
凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基。
1）細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型*凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經過優(yōu)化，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細胞凍存方案：
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案，必須參閱針對具體細胞的產品說明書。 
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細胞。
3.采用、細胞計數儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數儀測定總細胞數和活細胞百分比。根據所需活細胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細胞沉淀。
注：離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀，將其調整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應不時輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C。或者，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。

實驗材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個；
3、50ml離心筒2個 
4、滅菌培養(yǎng)皿1個，細胞培養(yǎng)瓶1個 
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 
6、細胞計數板1塊； 
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 
8、酒精燈1臺；

實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
   1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
   3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
   4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
   5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
   2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
   4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
   5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
   6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。

巖白菜素Vaccarin；王不留行黃酮苷RNA熒光（RiboGreen）定量檢測試劑盒

巖大戟內酯BTrigonelline；葫蘆巴堿RPE蛋白標記試劑盒（不含RPE）

巖藻黃質Perillyl Alcohol；紫蘇RPMI 1640*培養(yǎng)液

鹽酸氨基葡萄糖Mexiletine hydrochloride；鹽酸美西律RPMI 1640*培養(yǎng)液（無抗生素）

鹽酸巴馬汀Cynaroside；木犀草苷RPMI 1640培養(yǎng)基A谷氨酰、高糖B酮酸鈉、HEPES、高糖C高糖、谷氨酰、HEPESD谷氨酰、酮酸鈉、HEPES

鹽酸白屈菜紅堿Pterostilbene；紫檀芪RPMI1640培養(yǎng)基

鹽酸吡格列酮3-Hydroxy-4-methoxycinnamic acid；異阿魏酸RUNX3蛋白表達ELISA定量檢測試劑盒

鹽酸川芎Tridodecanoin；三月桂酸甘油酯/甘油三酯RUNX3蛋白免疫共沉淀分析試劑盒

鹽酸黃柏堿Tranilast；曲尼司特RyR受體蛋白表達ELISA定量檢測試劑盒

鹽酸黃連堿Hordenine；大麥芽堿RyR受體蛋白表達檢測試劑盒

鹽酸羅格列酮Perillene；紫蘇烯RyR受體蛋白免疫共沉淀分析試劑盒

鹽酸青藤堿Glycyrrhizic acid ammonium salt；甘草酸單銨鹽/甘草酸銨S1核酶保護法檢測試劑盒

鹽酸去氫駱駝蓬堿Ginsenoside F1；人參皂苷F1SAGE基因表達文庫構建技術服務

鹽酸石蒜堿Allicin；大蒜素SAGE基因表達文庫構建技術試劑盒

鹽酸水蘇堿Thiamine Nitrate；硝酸硫/維生素B硝酸鹽Schenk & Hildebrandt基礎培養(yǎng)基
Hacat 細胞魚骨鈣素/骨谷氨蛋白具棲冬青苷(標準品)Human

大鼠表皮生長因子受體瞿麥（標準品）Human, Mouse, Rat

小鼠骨退化特異標志物卷柏(墊狀卷柏)（標準品）Human, Mouse, Rat

小鼠Ⅰ型膠原C端肽卷柏(卷柏)（標準品）Human, Mouse

大鼠白介素2可溶性受體決明蒽醌;美決明子素（標準品）Human, Mouse

紅螯光殼螯蝦卵黃脂磷蛋白/卵黃磷蛋白決明子（標準品）Human, Mouse, Rat

兔心肌特異性肌鈣蛋白T決明子（小決明）（標準品）Human, Mouse

人黏膜地址素黏附分子爵床（標準品）Human, Mouse, Rat

兔溶菌酶咖啡乙酯（標準品）Human
注意事項：
     盡管經測試Annexin V-FITC反復凍融5次對于其檢測效果無顯著影響，但為取得良好的使用效果，3-6個月內推薦4℃保存，并適當注意避免反復凍融。
     如果有細菌或真菌污染，會嚴重影響檢測效果。
     染色后宜盡快檢測，時間過長可能會導致凋亡或壞死細胞的數量增加。
     如果細胞收集過程中使用了胰酶，需注意設法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC，導致染色失敗。
     熒光物質均易發(fā)生淬滅，在進行熒光觀察時，盡量縮短觀察時間，同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
     用于流式細胞儀檢測時，如果發(fā)現Annexin V-FITC單獨染色時出現了過多的PI假陽性細胞，并且通過調整相關設置和參數也無法改善，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進行檢測，這樣通常可以有效減少假陽性的壞死細胞。
     需自備PBS。
     本產品于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。
     為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。